基因組編輯技術(shù)在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用推動(dòng)了作物改良，但以DNA形式遞送基因編輯工具的方式存在外源DNA整合風(fēng)險(xiǎn)和脫靶效應(yīng)。近年來(lái)，無(wú)外源DNA殘留的基因組編輯遞送技術(shù)備受關(guān)注。盡管基于核糖核蛋白的遞送策略在小麥等作物中實(shí)現(xiàn)了T0代基因敲除，但其復(fù)雜的制備與操作限制了應(yīng)用。相比之下，mRNA遞送策略具有制備靈活、可大規(guī)模生產(chǎn)的優(yōu)勢(shì)，可為基因編輯提供高效且安全的替代方案。
2016年，中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所高彩霞研究組建立了基因槍介導(dǎo)的mRNA遞送方法，在T0代小麥中獲得無(wú)外源DNA整合的基因敲除突變體。當(dāng)前，植物中的mRNA遞送系統(tǒng)效率較低，且在精準(zhǔn)基因編輯如堿基編輯和引導(dǎo)編輯方面的應(yīng)用鮮有報(bào)道。近日，高彩霞研究組通過(guò)優(yōu)化體外轉(zhuǎn)錄mRNA（IVT）的翻譯效率與遞送穩(wěn)定性，開發(fā)了新型基因槍介導(dǎo)的mRNA遞送系統(tǒng)v2_TMV/DEN2，提高了植物基因編輯效率，并在植物中實(shí)現(xiàn)了高效的C-to-T和A-to-G堿基編輯。
該研究系統(tǒng)性優(yōu)化了體外轉(zhuǎn)錄RNA（IVT）的翻譯效率與遞送穩(wěn)定性。研究發(fā)現(xiàn)，煙草花葉病毒（TMV） 5'UTR與120nt poly（A）尾可使IVT mRNA在原生質(zhì)體中的翻譯效率提升12.9倍，在水稻懸浮細(xì)胞中的編輯效率提高1.9倍。進(jìn)一步，研究引入登革熱病毒（DEN2）5'UTR序列，采用魚精蛋白包被技術(shù)，提高了基因編輯效率并構(gòu)建了新型mRNA遞送系統(tǒng)v2_TMV/DEN2。與廣泛使用的質(zhì)粒形式的遞送方式相比，v2_TMV/DEN2在T0代水稻和小麥中的編輯效率平均提高了4.3倍和3.5倍。研究對(duì)T0代水稻突變體進(jìn)行全基因組測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)，v2_TMV/DEN2獲得的突變體均無(wú)外源DNA片段整合。
2月10日，相關(guān)研究成果在線發(fā)表在《植物生物技術(shù)雜志》（Plant Biotechnology Journal）上。研究工作得到國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃、中國(guó)科學(xué)院戰(zhàn)略性先導(dǎo)科技專項(xiàng)、山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（農(nóng)業(yè)良種工程）等的支持。
新型mRNA遞送系統(tǒng)v2_TMV/DEN2可在水稻和小麥中高效實(shí)現(xiàn)多種編輯形式
本文鏈接：科研人員開發(fā)出高效植物mRNA遞送系統(tǒng)http://m.sq15.cn/show-12-717-0.html
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