近日，中國科學院分子細胞科學卓越創新中心代海強研究組與吳薇研究組，基于高通量全基因組易位測序技術，開發出新型DNA測序方法HTGTS-TCR-seq，旨在精準解析αβ T細胞受體（TCR）重排過程。
傳統TCR檢測方法主要依賴多重PCR和5'RACE等技術，但mRNA水平的5'cDNA末端快速擴增技術受轉錄本豐度影響，無法反映DNA水平的初始重排情況。同時，DNA水平的多重PCR需大量特異性引物，始終存在引物偏倚。
研究基于線性擴增介導的PCR技術，通過對TCR基因片段進行有限數量的引物設計，靶向TCR基因片段，從而直接捕獲基因組重排事件。該方法從源頭上規避了引物偏倚，在DNA層面實現對重組效率、功能性與非功能性TCR重排的檢測分析。
研究進一步利用該體系，對小鼠胸腺細胞不同發育階段進行分析。結果顯示：DN3發育階段非功能性重組頻率較高，陽性選擇前的雙陽性胸腺細胞功能性重組頻率較高，與理論預期高度吻合；雙陽性胸腺細胞在Tcra重排上呈現出階梯式重排特征，印證了連續發生的初級與次級重排事件模型。
在年齡相關研究中，團隊發現衰老改變Vα片段的使用偏好。這一趨勢在胸腺非成熟T細胞和外周成熟T細胞中均一致，提示小鼠中這一增齡性改變源于胸腺輸出環節。為將方法應用推廣至機制研究，團隊剖析Wapl基因敲除的陽性選擇前的雙陽性胸腺細胞發現，黏連蛋白卸載因子WAPL獨立于細胞分裂的作用，進而影響Tcra基因重排。同時，團隊通過對人源特異性引物設計，將應用推廣至人類外周T細胞樣品。
這一研究建立了新型無偏倚的基因組TCR測序方法，揭示了發育階段特異性V/J片段使用規律及增齡性TCR變化，證實該方法在人類樣本中具有同等應用潛力，為T細胞發育、衰老和免疫相關疾病等研究提供了新視角。
10月27日，相關研究成果在線發表在《先進科學》（Advanced Science）上。研究工作得到國家重點研發計劃、國家自然科學基金、中國科學院戰略性先導科技專項、中國科學院國際伙伴計劃等的支持。
論文鏈接
HTGTS-TCR-seq技術示意圖
本文鏈接：研究開發出無偏倚基因組TCR測序新技術http://m.sq15.cn/show-12-2005-0.html
聲明：本網站為非營利性網站，本網頁內容由互聯網博主自發貢獻，不代表本站觀點，本站不承擔任何法律責任。天上不會到餡餅，請大家謹防詐騙！若有侵權等問題請及時與本網聯系，我們將在第一時間刪除處理。
上一篇： 稀土磷酸鹽玻璃的局域結構研究取得進展
下一篇： 枯草芽孢桿菌染色體研究取得進展